“敵鼠”(diphacinone) 是一種常見(jiàn)的抗凝血?dú)⑹髣瑢儆谲岫悮⑹笏?，其化學(xué)名為2 - (2 ，2 二苯基) 乙?；? 1 ，3 茚滿二酮，常使用其鈉鹽，稱為敵鼠鈉鹽。“敵鼠”為無(wú)嗅黃色針狀結(jié)晶，其鈉鹽為黃色粉末。“敵鼠”或其鈉鹽均為高毒品，對(duì)小鼠經(jīng)口LD50為112～196 mg/ kg ，鈉鹽LD50為6112～100. 7 mg/ kg ;成人口服0106～0. 25 g 敵鼠鈉鹽可引起中毒，015～2. 5 g 可致死。

該類藥主要的毒理作用是拮抗體內(nèi)維生素K1 的活性，阻礙凝血酶的合成，損害微血管，降低血液凝固能力，從而造成皮下出血和內(nèi)臟大量出血而引起死亡。該類藥以1/ 萬(wàn)的含量配成毒餌，用于衛(wèi)生滅鼠工作。此類殺鼠劑的中毒潛伏期較長(zhǎng)，發(fā)病緩慢，一般口服后3～4 d ，長(zhǎng)者19 d ，平均10 d 才出現(xiàn)中毒癥狀，死亡高峰為4～6 d。因誤服、使用不當(dāng)或有意投毒造成人和牲蓄中毒死亡的事件時(shí)有發(fā)生 。筆者對(duì)血和尿中的敵鼠鈉鹽采用不同的提取凈化方法，然后用化學(xué)分析法和薄層色譜法進(jìn)行分析，結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑硅膠GF254薄層板(10 cm ×5 cm) ，青島海洋化工廠生產(chǎn);紫外燈(波長(zhǎng)254 nm和366 nm) ;無(wú)水乙醇，乙酸乙酯，氯仿，甲醇，丙酮，四氯化碳，石油醚，苯，無(wú)水硫酸鈉，中性氧化鋁，均為分析純。10 %鹽酸，0101 mol/ L NaOH ，1 %三氯化鐵乙醇溶液;敵鼠鈉鹽(含敵鼠鈉80 %) 由中心消毒科提供，配成2 mg/ ml的丙酮溶液。

1.2 樣品的處理

1.2.1 血樣的處理取510 ml 血，加10 %鹽酸數(shù)滴調(diào)pH 值為3 ，用乙酸乙酯提取3 ×20 ml 次，合并提取液過(guò)自制的10 ml 正己烷淋洗過(guò)的凈化小柱(三極中性三氧化鋁： 無(wú)水硫酸鈉=0. 2∶015) ，收集濾液于60 ℃水浴揮干，得檢樣(血) 。

1.2.2 尿樣的處理取15 ml 尿，加10 %鹽酸數(shù)滴調(diào)pH 值為3 ，用乙酸乙酯提取3 ×30 ml 次，合并提取液用0101 mol/ L NaOH調(diào)pH至9 ，棄有機(jī)相，再用乙酸乙酯提取水相3 ×20 ml ，合并乙酸乙酯提取液過(guò)正己烷淋洗過(guò)的凈化小柱(三極中性三氧化鋁∶無(wú)水硫酸鈉= 0. 2∶0. 5) ， 收集濾液于60 ℃水浴揮干， 得檢樣(尿) 。

1.2.3 對(duì)照品的處理各取2 g 敵鼠鈉鹽，分別按血和尿的處理方法提取凈化后，揮干得對(duì)照品(1) 和(2) 。并把直接用丙酮溶解的2 mg/ ml 敵鼠鈉鹽作為對(duì)照品(3) 。

1.3 “敵鼠”的檢驗(yàn)

1.3.1 化學(xué)分析法—三氯化鐵顯示反應(yīng)分別取用1 ml丙酮溶解的檢樣(尿) 、檢樣(血) 、對(duì)照品(1) 和(2) 以及2 mg/ ml 的對(duì)

照品(3) 溶液1 滴滴于濾紙上，加1 %的三氯化鐵醇溶液1 滴。

1.3.2 薄層分析法把上述檢樣和對(duì)照品分別點(diǎn)樣于硅膠GF254薄層板上，在3 組不同的展開劑中展開。經(jīng)展開涼干后， ①在254nm波長(zhǎng)的紫外光照射下觀結(jié)果;②在366 nm波長(zhǎng)的紫外光照射下觀察結(jié)果;③上述薄層板噴霧1 %三氯化鐵乙醇溶液后再觀察結(jié)果。展開劑： ①三氯甲烷∶乙酸乙酯∶乙酸= 4∶2∶1②四氯化碳∶甲醇= 2∶1③石油醚∶苯= 10∶1

2 結(jié)果

三氯化鐵顯色反應(yīng)對(duì)照品及樣品與三氯化鐵的反應(yīng)均呈磚紅色。

3 討論

3.1 提取凈化條件的選擇

3.1.1 血樣的凈化由于血樣少，檢材有限，所以在提取凈化過(guò)程中中性Al2O3 和無(wú)水Na2SO4 的量一定要適度。用量大了，“敵鼠”的提取率低。可能無(wú)法檢驗(yàn);用量小了，凈化效果不好，最終影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)表明：采用中性Al2O3∶無(wú)水Na2SO4 =0. 2∶015 ，正好使510 ml 血樣得到很好凈化。

3.1.2 尿樣的處理尿樣成分較復(fù)雜，實(shí)驗(yàn)比較了直接用自制小柱凈化與用反提后再過(guò)小柱，發(fā)現(xiàn)用10 %鹽酸調(diào)pH 3 提取后再用的0101 mol/ L NaOH調(diào)pH 9 反提，凈化效果更好，雜質(zhì)對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的干擾小。

3.1.3 展開劑的選擇通過(guò)對(duì)3 組不同展開劑的Rf 值及顯色結(jié)果的比較，發(fā)現(xiàn)雖然一些文獻(xiàn)常推薦石油醚∶苯(10∶1) 作為敵鼠鈉鹽薄層色譜檢驗(yàn)的展開劑，但對(duì)于生物檢材，這組展開劑分離效果并不好。在實(shí)驗(yàn)用的3 組展開劑中，四氯化碳∶甲醇(2∶1) 的展開效果最好。

3.2 檢測(cè)方法的比較三氯化鐵顯色反應(yīng)和薄層法的檢測(cè)結(jié)果一致。三氯化鐵顯色反應(yīng)分析速度快，簡(jiǎn)便易行，可以作為一種篩選方法使用，要作進(jìn)一步確認(rèn)可用薄層法。

3.3 本實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵是檢材的提取凈化如果凈化不好，不能得到明顯的顯色結(jié)果。檢材通過(guò)自制小柱凈化后，得到斑點(diǎn)清晰、分離出好的圖譜。